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　　摘要：基于非病毒的大片段DNA定点整合方法具有成本低、容量大、无免疫原性，以及可以可避免遗传毒性和癌基因的表达等优点，在基因治疗、细胞治疗等领域广泛应用。根据作用机制，可将基于非病毒的DNA定点整合方法分为3种，基于DNA损伤修复的、基于重组酶的和基于转座酶的。3种基于非病毒的DNA定点整合方法均可以与规律成簇的间隔短回文重复序列(clustered regularly interspaced short palindromic repeats，CRISPR)及其相关蛋白9(CRISPR-associated proteins，Cas9)技术结合，快速、方便地将外源DNA引导至目标DNA区域。本研究总结了3种基于非病毒的DNA定点整合方法的研究进展及其在基因整合方面的应用，以期为开发更高效的细胞治疗体系提供新思路。

　　文章目录

　　1 基于核酸内切酶和DNA损伤修复的定点整合

　　1.1 基于HDR途径的外源DNA整合方法

　　1.2 基于NHEJ途径的外源DNA整合方法

　　1.3 小结

　　2 基于重组酶/整合酶的定点整合

　　2.1 Cre

　　2.2 Flp

　　2.3 φC31整合酶

　　2.4 Bxb1整合酶

　　3 基于转座酶的定点整合

　　3.1 转座酶与靶向核酸内切酶结合

　　3.2 CRISPR相关转座子

　　4 总结与展望