牛FMR1基因5'UTR克隆及生物信息学分析

2024-06-02 浙江农业科学470 1.19M 0

  摘要:为了探讨西门塔尔牛脆性X智力低下基因1(Fragile X mental retardation gene 1,FMR1)的生物学功能,并为研究FMR1在西门塔尔牛屡配不孕中发挥的作用提供数据支持。实验以西门塔尔牛血液DNA为模板,通过PCR方法克隆FMR1基因完整的5′UTR序列;与NCBI提供的牛FMR1基因mRNA全序列进行比对;利用在线软件进行遗传分析并构建系统进化树,分析FMR1基因5′UTR端脆性;分析该基因编码蛋白的理化性质、亲疏水性、磷酸化位点、跨膜结构、信号肽、二级结构、三级结构和互作蛋白。结果表明:西门塔尔牛FMR1基因5′UTR序列与NCBI提供的牛FMR1基因序列基本一致,生信分析得到牛FMR1基因最长开放阅读框1 710 bp,基因共编码569个氨基酸,分子量64 221.90 u,其编码蛋白是不稳定的亲水蛋白,没有明显的信号肽切割位点,并且不包括跨膜螺旋,二级结构预测表示其主要以α螺旋和无规则卷曲形式为主。说明西门塔尔牛FMR1基因编码序列长度为40 254 bp,编码569个氨基酸,编码的蛋白质为亲水不稳定蛋白,与绵羊遗传距离最近。

  文章目录

  1 材料与方法

  1.1 试验动物

  1.2 主要试剂

  1.3 主要仪器

  1.4 DNA提取

  1.5 PCR扩增及克隆

  1.6 生物信息学分析

  2 结果与分析

  2.1 DNA提取

  2.2 PCR扩增及克隆

  2.3 生物信息学分析

  2.3.1 遗传距离分析及系统进化树构建

  2.3.2 理化性质分析

  2.3.3 疏水性预测

  2.3.4 N-糖基化位点预测

  2.3.5 FMR1蛋白跨膜区及信号肽预测

  2.3.6 二级结构和三级结构预测

  2.3.7 功能结构预测及蛋白互作分析

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