摘要：水稻Rho GDP解离抑制因子1(Rho GDP dissociation inhibitor 1， RhoGDI1)是本实验前期通过酵母双杂交筛选从幼穗中分离的一个与小G蛋白Rho/Rop家族成员OsRac5相互作用蛋白的编码基因，对该基因特征及其功能的研究尚未见报道。本研究在对OsRhoGDI1开展生物信息学分析的基础上，利用表达谱芯片挖掘和RT-qPCR对OsRhoGDI1基因的表达模式进行分析，发现该基因在水稻多种组织中广泛表达，尤其在幼穗发育过程中高表达，且该基因的表达受脱落酸(abscisic acid， ABA)、油菜素内酯(brassinolide， BL)、水杨酸(salicylic acid， SA)、吲哚-3-乙酸(indole-3-acetic acid， IAA)、赤霉素(gibberellin， GA)及盐胁迫的调控。亚细胞定位鉴定显示，OsRhoGDI1分布在细胞膜、细胞质以及细胞核中。双分子荧光互补技术(bimolecular fluorescence complementation， BiFC)检测发现OsRhoGDI1与OsRac5在细胞膜、细胞质和细胞核均能发生互作，OsRhoGDI1还可与OsRac1在细胞膜上相互作用。本研究表明，OsRhoGDI1可能与水稻穗发育等过程密切相关，并且OsRhoGDI1可能通过与不同Rho/Rop蛋白结合并调节其活性，参与调控水稻生长发育、激素应答以及非生物胁迫等多种生物学过程。
文章目录
1 材料与方法
1.1植物材料
1.2菌株与载体
1.3 主要试剂及试剂盒
1.4 引物设计及合成
1.5 OsRhoGDI蛋白的生物信息学分析
1.6 OsRhoGDI1基因的表达模式分析
1.6.1 OsRhoGDI1基因的表达谱数据挖掘
1.6.2 OsRhoGDI1基因的时空表达模式
1.6.3 激素及盐胁迫对OsRhoGDI1基因表达的影响
1.7 OsRhoGDI1蛋白亚细胞定位的鉴定
1.7.1 OsRhoGDI1蛋白亚细胞定位的预测
1.7.2 OsRhoGDI1-GFP瞬时表达载体的构建
1.7.3 OsRhoGDI1-GFP融合蛋白亚细胞定位的观察
1.8 OsRhoGDI1与2种Rop蛋白互作的鉴定
1.8.1 BiFC重组载体的构建
1.8.2烟草的转化及观察
2 结果与分析
2.1 OsRhoGDI1基因及其编码蛋白的生物信息学分析
2.1.1 OsRhoGDI1序列特征及理化特征分析
2.1.2 OsRhoGDI1基因的系统进化分析和同源序列比对
2.2 OsRhoGDI1基因的表达模式分析
2.2.1水稻RhoGDI家族和Rho/Rop家族的表达谱芯片数据分析
2.2.2 OsRhoGDI1基因在水稻发育过程中的时空表达模式
2.2.3 OsRhoGDI1基因对激素和盐胁迫的响应
2.3 OsRhoGDI1蛋白亚细胞定位的鉴定
2.3.1 OsRhoGDI1蛋白胞内分布的生物信息学预测
2.3.2 OsRhoGDI1蛋白亚细胞定位的观察
2.4 OsRhoGDI1与OsRac1及OsRac5体内相互作用的检测
3 讨论与结论
