摘要：目的 研究清毒汤对肠屏障的保护作用，探讨清毒汤保护肠屏障治疗慢加急性肝衰竭内毒素血症的机制。方法 不同浓度的脂多糖（lipopolysaccharides，LPS）处理HIEC-6细胞，通过细胞毒性法（cell counting kit-8，CCK-8）检测LPS对HIEC-6细胞存活率的影响。采用实时荧光定量PCR（quantitative real-time PCR，qRT-PCR）法检测闭锁小带蛋白（zonula occludens-1，ZO-1）、闭合蛋白（Occludins）的mRNA表达情况，在体外构建肠屏障损伤的模型。通过蛋白免疫印迹法（western blot，WB）检测清毒汤对肠屏障紧密连接蛋白ZO-1、Occludin的表达水平的影响。利用qRT-PCR法检测通路蛋白表皮生长因子受体（epidermal growth factor receptor，EGFR）、血清连蛋白（Zonulin）及miRNA122a的mRNA表达情况。结果 CCK-8法、qRT-PCR法的检测结果显示120 μg/mL LPS作为构建肠屏障损伤模型的浓度较为合适。qRT-PCR的结果表明，5%清毒汤含药血清能显著改善LPS对肠上皮细胞间紧密连接蛋白ZO-1、Occludin的mRNA的下调作用，因此后续实验中选取5%清毒汤作为实验条件。WB的结果表明，清毒汤能明显改善LPS对肠上皮细胞间紧密连接蛋白ZO-1、Occludin的下调作用。qRT-PCR的结果表明，清毒汤能明显降低通路蛋白EGFR、Zonulin及miRNA122a的表达。结论 清毒汤可能通过miR122a靶向EGFR调控Zonulin蛋白从而调节肠道紧密连接的表达，保护肠屏障，治疗慢加急性肝衰竭内毒素血症。
文章目录
1 材料及方法
1.1实验细胞
1.2实验动物及饲养环境
1.3实验中药配制
1.4实验试剂
1.5主要仪器
1.6清毒汤含药血清制备
1.7细胞增值和细胞毒性法（cell counting kit-8，CCK-8）检测HIEC-6细胞活性
1.8 HIEC-6细胞肠屏障紧密连接蛋白ZO-1、Occludin的mRNA表达水平检测
1.9蛋白免疫印迹法（western blot，WB）法检测肠屏障紧密连接蛋白ZO-1、Occludin的表达水平
1.10信号通路关键分子miRNA122a、EGFR、zonulin表达水平检测
1.11统计学方法
2 结果
2.1 LPS对HIEC-6细胞的活性的影响结果
2.2 清毒汤能改善LPS对HIEC-6细胞紧密连接蛋白的影响。
2.3 Western blot法检测清毒汤对肠屏障紧密连接蛋白ZO-1、Occludin表达水平的影响。
2.4清毒汤对信号通路关键分子miRNA122a、EGFR、zonulin表达水平检测的影响
3 讨论
