摘要:目的:尘螨过敏原Der p 7新的IgE抗原表位鉴定及尘螨交叉反应性的研究。方法:ELISA检测华东地区安徽省合肥市的尘螨过敏患者与尘螨过敏临床相关性较高的重组蛋白Der p 7的IgE结合率;通过ELISA和Dot Blot鉴定屋尘螨过敏原Der p 7的新IgE抗原表位;利用圆二色光谱法检测Der p 7和其突变体的结构及热稳定性;最后用ELISA和ELISA抑制实验鉴定尘螨新的交叉过敏物质。结果:通过ELISA实验检测发现,华东地区的合肥市内尘螨过敏患者体内IgE与Der p 7的结合率为36.2%,与华南地区的广州市(37.4%)和西班牙(34.7%)相近。然而,这一结合率受到地理区域、自然环境和生活方式等多种因素的影响,与华北地区的北京市(19.3%)、乌克兰(22.67%)、意大利(28%)相比明显较低,而与非洲(56%)和日本(超过60%)相比则显著不同。ELISA和Dot Blot鉴定出尘螨重要过敏原Der p 7的两个新IgE抗原结合表位,分别是第36位天冬氨酸和第100位天冬氨酸。用圆二色光谱实验证明了Der p 7的结构稳定性,且突变后结构未发生改变,并检测了其热稳定性特征。最后用ELISA和ELISA抑制实验新发现了两种与尘螨存在交叉过敏的物质(小麦和花生)。结论:基于尘螨过敏原Der p 7与华东地区安徽省合肥市内过敏患者IgE的结合率及新的IgE抗原表位的研究为预防、诊断、治疗过敏性疾病提供理论基础,对开发尘螨过敏原低敏疫苗具有参考价值。发现新的尘螨交叉过敏物质为交叉过敏反应的预防、治疗提供了科学依据。
文章目录
1 材料和方法
1.1 材料
1.1.1 血清样本
1.1.2 试剂
1.1.3 仪器
1.2 实验方法
1.2.1 尘螨过敏原Der p 7的新IgE抗原表位预测及其突变体的构建、表达纯化
1.2.2 IgE-ELISA实验鉴定rDer p 7和rDer p 7突变体的特异性IgE结合能力
1.2.3 Dot Blot实验鉴定rDer p 7和rDer p 7突变体的特异性IgE结合能力
1.2.4 圆二色光谱(CD)分析rDer p 7和突变体的结构及热稳定性
1.2.5 粗尘螨与某些过敏原之间的IgE结合交叉反应性评估
2 研究结果
2.1 IgE-ELISA分析尘螨过敏患者血清与rDer p 7的结合情况
2.2 rDer p 7突变体的定点突变、表达及纯化
2.3 IgE-ELISA和斑点印迹(Dot Blot)实验鉴定Der p 7新的IgE结合表位
2.4 Der p 7新特异性IgE结合表位数量与sIgE浓度有关
2.5 圆二色光谱法(CD)检测rDer p 7和突变体的结构及热稳定性
2.6 尘螨与其他过敏原之间的IgE结合交叉反应性评估
3 讨论