目的:对广藿香青枯病菌Kosakonia cowanii Pa82(野生株Pa82)致病相关基因vgr G进行功能鉴定。方法:对野生株Pa82及其vgr G基因突变的低致病力突变株进行转录组高通量测序,筛选与vgr G基因关联的差异表达基因并进行RT-qPCR验证;构建了vgr G基因突变株的基因回补株,并对其致病性相关表型进行了检测。结果:从vgr G基因突变株转录组测序数据中筛选得到73个与野生株Pa82有差异表达的基因,其中vgr G及其下游基因JMT66＿10485(10485)、JMT66＿10490(10490)、JMT66＿10500(10500)表达量同时下调,生物信息学分析表明基因vgr G、10485、10490编码的蛋白与六型分泌系统(T6SS)的组装及其功能相关,10500基因编码的蛋白为假定蛋白;RT-qPCR结果表明4个基因的表达趋势与转录组测序结果一致;采用三亲本杂交法,成功构建了vgr G基因突变株的vgr G、10485、10490、10500基因的回补株C-vgr G、C-10485、C-10490、C-10500;RT-qPCR检测结果表明上述4个基因回补株中的vgr G、10485、10490、10500基因的表达均得到恢复,且vgr G基因突变株中回补vgr G基因能同时恢复vgr G基因及其下游3个关联基因的表达;致病性实验表明,4个基因回补株的致病力均恢复了野生株的表型;菌间竞争实验表明,回补株C-vgr G、C-10500细菌间竞争能力恢复了野生株的表型。结论:vgr G基因及其下游基因10485、10490、10500均为广藿香青枯病病原菌株Kosakonia cowanii Pa82的致病相关基因,其中vgr G与10500基因在病原细菌与其他细菌拮抗中发挥重要作用;vgr G基因通过调控下游10485、10490、10500基因的表达,影响病原菌对广藿香的致病性。
