摘要：本研究旨在解析东方蜜蜂微孢子虫Nosema ceranae的腺苷酸激酶(Adenylat kinase， ADK)NcADK的理化性质和分子特性，并检测NcADK基因在东方蜜蜂微孢子虫侵染意大利蜜蜂Apis mellifera ligustica工蜂过程中的表达特征，以期丰富NcADK相关信息，并为进一步的功能研究提供依据。利用相关生物信息学软件预测和分析NcADK的理化性质、信号肽、磷酸化位点、二级结构和三级结构。使用MEME软件和Batch CD-Search工具分别预测东方蜜蜂微孢子虫和其它7种微孢子ADK蛋白的保守基序和保守结构域。通过Mega 11.0软件基于ADK氨基酸序列构建进化树。采用RT-qPCR检测东方蜜蜂微孢子虫侵染过程中NcADK的相对表达量。结果表明，NcADK的CDS含有540个核苷酸，可编码179个氨基酸；NcADK的分子量约为20.66 kDa，分子式为C903H1488N258O278S8，脂肪系数为100.61，平均亲水系数为-0.502，等电点为6.83，含29个负电荷氨基酸和29个正电荷氨基酸；NcADK可同时定位于细胞质、线粒体、细胞核、囊泡和过氧化物酶体；NcADK含20个磷酸化位点，不含典型的信号肽；NcADK含88个α-螺旋，24条延长链，17个β-转角，50个无规则卷曲，与模板A0A0F9WEU7.1.A之间的序列同源性为100%；在东方蜜蜂微孢子虫、东方赤孢子虫Hamiltosporidium tvaerminnensis、肠脑炎微孢子虫Encephalitozoon intestinalis、按蚊微孢子虫Anncaliia algerae和角膜条孢虫Vittaforma corneae ADK中均鉴定到1个相同的结构域和5个相同的保守基序；东方蜜蜂微孢子虫与蜜蜂微孢子虫Nosema apis的ADK在进化树上聚为一支。相较于接种后1 d(1 day post inoculation， 1 dpi)，NcADK的表达量在2 dpi上调但无显著差异(P > 0.05)，在3 dpi和4 dpi均显著上调(P < 0.05)。研究结果明确了NcADK的理化性质和分子特性，并揭示NcADK是潜在的亲水性蛋白和胞内蛋白，不同微孢子虫的ADK具有较强的保守性，东方蜜蜂微孢子虫及其姐妹种蜜蜂微孢子虫的ADK具有高同源性，NcADK在3 dpi和4 dpi被激活表达。
文章目录
1 材料与方法
1.1 生物材料
1.2 NcADK蛋白的生物信息学分析
1.3 ADK蛋白的保守基序和结构域分析
1.4 东方蜜蜂微孢子虫孢子的初步提取和纯化
1.5 工蜂接种及中肠样品制备
1.6 RT-qPCR检测
2 结果与分析
2.1 NcADK蛋白的理化性质和分子特性
2.2 NcADK蛋白的结构域和保守基序
2.3 ADK蛋白的系统进化
2.4 东方蜜蜂微孢子虫侵染意蜂工蜂过程中NcADK基因的表达特征
3 结论与讨论
