摘要:目的:基于Hedgehog信号通路探究香连化浊方对慢性萎缩性胃炎大鼠的治疗作用及作用机制。方法:采用水杨酸钠、N-甲基-N′-硝基-N-亚硝基胍(MNNG)及饥饱失常多因素建立慢性萎缩性胃炎(CAG)大鼠模型,将造模成功的CAG大鼠随机分为模型组、摩罗丹组、香连化浊方组(高、中、低剂量),后用药干预。苏木素-伊红(HE)法观察大鼠胃黏膜组织形态学变化,透射电镜法观察各组大鼠胃黏膜细胞的超微结构,实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-timePCR)法测定音猬因子(Shh)、跨膜蛋白受体1(Ptch1)、神经胶质瘤相关癌基因同源物1(Gli1)mRNA表达,蛋白免疫印迹法(Western-blot)检测胃黏膜组织中Shh、Ptch1、Gli1蛋白表达水平,免疫组织化学法观察大鼠胃黏膜组织上皮标志物E-钙黏蛋白(E-cadherin)蛋白表达。结果:与正常组对比,CAG模型组大鼠胃黏膜固有腺体减少,并见炎细胞浸润;大鼠胃黏膜细胞超微结构发生核固缩,线粒体数量变少且结构异常;模型组大鼠胃黏膜Shh、Ptch1、Gli1mRNA及蛋白表达明显降低(P<0.05);大鼠胃黏膜E-cad蛋白表达下降。与模型组比较,各用物干预组大鼠组织病理形态及胃黏膜细胞超微结构有不同程度改善,Shh、Ptch1、Gli1mRNA、蛋白表达及E-cadherin蛋白表达有不同程度升高,香连化浊方可上调Hedgehog关键因子mRNA、蛋白及E-cad蛋白表达(P<0.05)。结论:香连化浊方对CAG大鼠具有治疗作用,其作用机制可能与激活Hedgehog信号通路,抑制上皮间充质转化(EMT)的发生有关。
文章目录
1 材料
1.1 动物
1.2 实验药物
1.3 试剂
1.4 仪器
2 方法
2.1 造模分组及给药
2.2 HE法观察胃黏膜组织病理变化
2.3 透射电镜观察大鼠胃黏膜细胞
2.4 蛋白免疫印迹法(Western blot)检测Shh、Ptch1、Gli1蛋白表达
2.5 Real-time PCR检测Shh、Ptch1、Gli1 mRNA的表达
2.6 免疫组织化学检测胃黏膜组织E-cadherin蛋白水平
2.7 统计分析
3 结果
3.1 各组大鼠胃黏膜组织病理形态
3.2 各组大鼠胃黏膜细胞超微结构
3.3 各组大鼠胃黏膜组织Shh、Ptch1、Gli1蛋白水平比较
3.4 各组大鼠胃黏膜组织Shh、Ptch1、Gli1 mRNA表达比较
3.5 各组大鼠胃黏膜组织E-cadherin蛋白水平比较
4 讨论