摘要：可可花瘿病致病菌白壳Albonectria rigidiuscula是我国进境植物检疫性有害生物，已在多个口岸植物入境产品中被截获，存在较大生物入侵风险。为探索口岸适用的现场快速检测技术，根据白壳翻译延长因子TEF1-α的基因序列，基于酶介导双重指数扩增核酸检测技术设计了针对白壳的5条DNA上游引物、6条DNA下游引物和4条RNA探针。通过筛选，获得了扩增效果最佳的上、下游DNA引物和RNA探针组合。灵敏度实验结果表明，其最低检测限量可达0.5 pg·μL-1。实际样品检测结果表明，该方法适用于口岸疑似携带有白壳样品的检测与初筛。该方法具有操作简便、耗时较短、特异性强等优点，整个反应过程仅需30 min，检测过程完全闭管且不需要PCR后续处理，为口岸现场白壳检测筛查提供了重要参考。
文章目录
1 材料与方法
1.1 供试菌株
1.2 供试培养基和试剂盒
1.3 引物及探针的设计合成
1.4 DNA提取
1.5 RNA探针筛选
1.6 DNA下游引物筛选
1.7 DNA上游引物筛选
1.8 特异性实验
1.9 灵敏度实验
1.10 实际样品检测实验
2 结果与分析
2.1 RNA探针筛选
2.2 初轮DNA下游引物筛选
2.3 初轮DNA上游引物筛选
2.4 特异性实验
2.5 灵敏度实验
2.6 实际样品检测实验
3 讨论
