摘要：目的：观察血府逐瘀胶囊(XFZY)通过调控Sirt3/ EPAC1信号通路对高脂饲料诱导的动脉粥样硬化(AS)小鼠血脂、主动脉斑块的影响，探讨血府逐瘀胶囊改善动脉粥样硬化的作用机制。方法：将小鼠分为正常组，模型组，空白组，瑞舒伐他汀组，血府逐瘀胶囊低、中、高剂量组，正常组用C57BL/6J正常小鼠，其余各组为同品系ApoE-/-小鼠。正常组和空白组常规饲养，其余各组采用高脂饲料喂养，连续24周构建小鼠动脉粥样硬化模型，血府逐瘀胶囊以0.3、0.6、1.2 g·kg-1·d-1剂量灌胃，瑞舒伐他汀组以0.05 g·kg-1·d-1剂量灌胃，正常组、模型组和空白组给予等体积去离子水灌胃，连续灌胃6周。采用小动物B超仪评估小鼠心功能和主动脉斑块情况；全自动生化分析仪检测小鼠总胆固醇(CHOL)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白-胆固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白-胆固醇(LDL-C)、极低密度脂蛋白(VLDL)等血脂指标；油红O染色观察主动脉脂质沉积情况；苏木素-伊红(HE)染色评估小鼠组织病理学改变；马松(Masson)染色观察小鼠血管内胶原沉积程度；透射电镜观察小鼠主动脉线粒体损伤情况；酶联免疫吸附法(ELISA)检测促肾上腺皮质激素(ACTH)、腺嘌呤核苷三磷酸(ATP)、烟碱型胆碱受体α1(CHRNα1)、总超氧化物歧化酶(T-SOD)等指标；实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-qPCR)检测小鼠主动脉及心脏组织中沉默信息调节因子3(Sirt3)、鸟嘌呤核苷酸转化因子交换蛋白1(EPAC1)、人重组型半胱天冬蛋白酶-3(Caspase-3)、B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、Bcl-2关联X蛋白(Bax)的mRNA相对表达；蛋白质免疫印迹(WB)实验检测Sirt3、EPAC1、Caspase-3、Bcl-2、Bax的蛋白相对表达。结果：B超结果显示，模型组主动脉弓多处形成动脉粥样硬化斑块，提示造模成功；经XFZY治疗后，与模型组相比，斑块明显缩小，斑块数量也明显减少。生化结果显示，与正常组相比，模型组CHOL含量显著升高(P ＜ 0.01)；与模型组相比，瑞舒伐他汀组、XFZY低剂量组中CHOL和TG含量均降低(P ＜ 0.01)。油红O染色结果显示，与正常组相比，模型组主动脉血管壁上可见大量凸起的红色脂质斑块，其AS斑块面积占组织总面积的百分比显著高于正常组(P < 0.01)；与模型组相比，XFZY低剂量组斑块负荷显著减少(P < 0.05)。HE和Masson染色结果可观察到，与模型组相比，XFZY各剂量组脂质斑块和胶原沉积显著减少。透射电镜结果显示，与正常组相比，模型组内皮细胞可见线粒体嵴减少或消失，膜结构损伤严重；各给药组血管内皮细胞线粒体形态趋近于正常结构，隐约可见线粒体嵴。ELISA结果显示，与正常组相比，模型组小鼠心肌线粒体ATP活性极显著下降(P < 0.01)，各治疗组与模型组相比均有显著提高(P < 0.01)。WB及RT-qPCR结果显示，与正常组相比，模型组Sirt3含量显著降低(P ＜ 0.01)，EPAC1的表达量明显升高(P ＜ 0.01)；与模型组相比，XFZY低剂量组Sirt3含量显著升高(P ＜ 0.01)，XFZY中剂量组EPAC1含量显著降低(P < 0.01)。提示经XFZY治疗后小鼠心脏组织的Sirt3蛋白及基因表达量明显升高，EPAC1的蛋白及基因表达量明显降低。结论：血府逐瘀胶囊可明显改善动脉粥样硬化小鼠血脂异常、主动脉脂质沉积、动脉粥样硬化斑块面积、内皮细胞线粒体形态和功能，增加ATP活性，提高Sirt3表达，同时抑制EPAC1的表达，其作用机制可能是通过调控Sirt3/ EPAC1信号通路调节线粒体能量代谢有关。
文章目录
1 材料
1.1 动物与饲料
1.2 药物
1.3 主要试剂和耗材
1.4 仪器
2 方法
2.1 实验动物分组、造模及给药
2.2 小动物B超仪观察斑块形成情况
2.3 血脂指标检测
2.4 心功能检测
2.5 油红O染色对小鼠主动脉进行病理分析
2.6 HE、Masson染色观察主动脉组织病理学变化
2.7 透射电镜观察线粒体超微结构
2.8 ELISA法检测血浆/血清中ACTH、CHRNα1、ATP含量
2.9 小鼠心脏组织氧化应激水平检测
2.10 Western blot检测Sirt3、EPAC1蛋白及通路相关凋亡蛋白的表达
2.11 主动脉及心脏组织的基因表达水平检测
2.12 统计分析
3 结果
3.1 对小鼠主动脉粥样硬化斑块的影响
3.2 对小鼠血脂的影响
3.3 对小鼠主动脉壁的影响
3.4 对小鼠主动脉组织的影响
3.5 对小鼠线粒体超微结构的影响
3.6 对小鼠血清指标的影响
3.7 对小鼠心脏组织中Sirt3、EPAC1、Caspase-3、Bcl-2、Bax蛋白表达水平的影响
3.8 对小鼠心脏和主动脉组织中Sirt3、EPAC1、Caspase-3、Bcl-2、Bax的mRNA表达水平的影响
4 讨论
