摘要：茴香醛是食品饮料、化妆品行业有广泛应用的香料。为提高生物合成的产量和转化率，研究了茴香醛的全细胞催化合成。将Paraburkholderia sp. MR185的反式茴脑加氧酶与反向蛋白XXA在大肠杆菌中融合表达，将诱导后的菌体用作全细胞催化剂转化反式茴脑合成茴香醛，并制成固定化细胞。诱导后的重组菌检测到了反式茴脑加氧酶活性，裂解液上清、沉淀中检测到了融合蛋白。优化诱导条件后，菌体酶活力达到9.3 U/g。优化全细胞催化条件后，转化液中茴香醛的产量达到1.62 g/L，摩尔转化率达到88.3%。用海藻酸钠包埋重组菌体细胞，将固定化细胞用于重复转化反式茴脑生成茴香醛的反应，得到的茴香醛产量达到1.26 g/L，摩尔转化率为68.5%，前3次的产量均达到1 g/L以上。该研究为首次应用大肠杆菌全细胞催化合成茴香醛，为茴香醛生物合成产业化提供了技术参考。
文章目录
1 材料与方法
1.1 材料与仪器
1.2 实验方法
1.2.1 表达载体的构建
1.2.2 重组蛋白的诱导表达
1.2.3重组菌株诱导表达条件优化
1.2.4全细胞催化初始反应条件
1.2.5重组菌全细胞催化条件优化
1.2.6固定化细胞催化合成茴香醛
1.2.7茴香醛的测定
2 结果与分析
2.1 重组表达载体的构建
2.2 重组蛋白的诱导表达
2.3 诱导表达条件优化
2.4 全细胞催化条件优化
2.4.1菌体量
2.4.2底物浓度
2.4.3催化反应温度
2.4.4催化反应pH
