摘要：目的：通过网络药理学和分子对接技术预测并筛选武威汉简“瘀方”干预高血压肾损伤的潜在分子靶点，通过动物实验分析“瘀方”对高血压肾损伤潜在靶点及通路表达的影响。方法：借助中药系统药理学数据库TCMSP以及PubChem获取武威汉简“瘀方”的有效活性成分并进行靶标转换，利用Gene Cards、OMIM数据库获取高血压肾损伤靶点；取武威汉简“瘀方”与高血压肾损伤交集靶点，构建交集靶点互作网络和拓扑分析，得到关键靶点；运用Auto Dock软件将关键化合物与高血压肾损伤关键蛋白受体进行分子对接；对关键靶点进行GO功能分析和KEGG通路富集分析；通过动物模型实验，对上述网络药理学和分子对接的结果进行确认和验证。将武威汉简“瘀方”颗粒剂对自发性高血压大鼠(SHR)进行灌胃治疗，治疗8周后，检测大鼠血压、尿蛋白、肌酐、尿素氮水平；透射电镜观察SHR大鼠肾脏组织形态改变，Western Blot、RT-PCR检测筛选得到的关键靶点以及相关信号通路的表达量。结果：武威汉简“瘀方”的主要活性成分槲皮素、山柰酚、β-谷甾醇等与Mdm2、Akt1、Sirt1等关键靶点对接良好，其中以槲皮素与各个靶点间的结合情况最为稳定。关键靶点主要参与调节自噬、巨噬细胞的负调控等生物过程，并富集于CellμLar senescence、PI3K-AKT、AMPK和P53等信号通路。动物实验研究结果显示，与正常对照组相比，模型对照组的血压显著升高（P＜0.01），尿蛋白、肌酐、尿素氮含量显著升高（P＜0.01），肾小球和肾小管内血管内皮的损伤加重，肾组织Mdm2、Akt1的mRNA表达上调，Sirt1mRNA表达下调（P＜0.01），P-PI3K、P-AKT1和MDM2蛋白表达上调，SIRT1蛋白表达下调（P＜0.01）；与模型对照组相比，“瘀方”干预后大鼠血压明显下降（P<0.01或P<0.05），尿蛋白、肌酐、尿素氮含量降低（P<0.01或P<0.05），肾组织Mdm2与Akt1的mRNA表达下调，Sirt1mRNA表达上调（P<0.01或P<0.05），P-PI3K、P-AKT1和MDM2蛋白表达下调，SIRT1蛋白表达上调（P<0.01或P<0.05）。结论:武威汉简“瘀方”对高血压肾损伤具有一定的保护作用，可能通过以槲皮素为代表的核心活性成分上调Sirt1的表达抑制PI3K-AKT-MDM2信号通路发挥保护作用。
文章目录
1材料及方法
1.1试验药物
1.2 动物
1.3 试剂
1.4 仪器
1.5 方法
1.5.1 中药复方有效活性成分筛选
1.5.2 原发性高血压肾损伤相关靶点筛选
1.5.3 蛋白质相互作用（PPI）网络的构建
1.5.4 对关键靶点进行GO分析和KEGG分析
1.5.5 对主要活性成分与关键靶点做分子对接
1.5.6 无创性血压计监测大鼠尾动脉压
1.5.7 生化试剂盒检测大鼠尿蛋白、肌酐、尿素氮含量
1.5.8 透射电镜观察肾脏组织病理形态学的改变
1.5.9 RT-PCR检测肾脏组织中Sirt1、Mdm2、Akt1mRNA的表达
1.5.10 Western Blot检测肾脏组织中SIRT1、MDM2、AKT1等靶蛋白的表达
1.5.11 统计学处理
1.5.11 统计学方法
2、结果
