摘要：硫苷类化合物参与植物防御反应，也是播娘蒿的药效物质之一。为了研究播娘蒿芳香族硫苷的生物合成途径，本研究根据播娘蒿基因组数据，设计特异性引物，以播娘蒿叶片cDNA为模板，通过PCR扩增DsUGT74B1基因，构建了pET-28a-DsUGT74B1原核表达载体，表达并纯化DsUGT74B1蛋白。通过荧光定量PCR检测DsUGT74B1基因在播娘蒿不同组织的相对表达量。结果表明，DsUGT74B1基因全长为1 729 bp，含有2个外显子和1个内含子，编码区(CDS)大小为1 395 bp，编码464个氨基酸。DsUGT74B1蛋白属于UDP-葡萄糖基转移酶家族成员，在C末端含有糖基转移酶的保守基序(PSPG motif)。DsUGT74B1蛋白与拟南芥、荠菜和亚麻荠等十字花科植物亲缘关系较近。经IPTG诱导后，在大肠杆菌BL21(DE3)细胞中成功表达了DsUGT74B1重组蛋白，而且在上清和沉淀中均有表达，利用Ni亲和层析得到纯化的DsUGT74B1蛋白。荧光定量PCR结果表明该基因在播娘蒿的根、茎、叶、果实、种子中均有表达，在果实中表达量最高，其次是种子。本研究为后续研究DsUGT74B1的酶学性质及其在播娘蒿芳香族硫苷生物合成途径中的功能提供一定参考。
文章目录
1 结果与分析
1.1 DsUGT74B1基因克隆
1.2 DsUGT74B1蛋白的序列分析
1.3 原核表达载体的构建
1.4 DsUGT74B1蛋白的诱导表达与纯化
1.5 DsUGT74B1基因在不同组织的表达分析
2讨论
3材料与方法
3.1试验材料
3.2 主要试剂
3.3 植物总RNA的提取与反转录
3.4 DsUGT74B1基因克隆
3.5 DsUGT74B1基因的序列分析
3.6原核表达载体构建
3.7 DsUGT74B1蛋白的诱导表达与纯化
3.8 DsUGT74B1基因表达特异性分析
作者贡献
