摘要：从环状RNA叉头框蛋白O3（circFOXO3）调控骨关节炎（OA）软骨细胞糖酵解角度，研究透骨消痛胶囊缓解OA退变的机制。在体内实验中，实验动物经随机分组进行相关干预后，通过形态学染色观察软骨组织结构变化；实时荧光 PCR法（RT-qPCR）检测软骨组织中circFOXO3的mRNA水平变化；蛋白免疫印迹法（Western blot）分析葡萄糖转运蛋白1（GLUT1）、己糖激酶2（HK2）、丙酮酸激酶M2（PKM2）、乳酸脱氢酶A（LDHA）和基质金属蛋白酶13（MMP13）蛋白表达变化。在体外实验中，荧光原位杂交（FISH）检测各组软骨细胞中circFOXO3的变化；构建慢病毒circFOXO3沉默（sh-circFOXO3）软骨细胞；RT-qPCR分析sh-circFOXO3后在软骨细胞中的水平变化；Western blot分析在sh-circFOXO3条件下，透骨消痛胶囊对白细胞介素（IL）-1β诱导的软骨细胞GLUT1、HK2、PKM2、LDHA和MMP13蛋白的调控。Masson染色和阿利新蓝染色结果显示，透骨消痛胶囊组和阳性药物组软骨层结构较模型组改善。透骨消痛胶囊组和阳性药物组的circFOXO3的mRNA水平显著上调，以上指标蛋白表达显著减少。FISH结果显示，透骨消痛胶囊能上调IL-1β诱导的软骨细胞中circFOXO3的荧光强度。在circFOXO3沉默实验中，与IL-1β组相比，IL-1β+sh-circFOXO3组中circFOXO3水平显著下降；与IL-1β+sh-circFOXO3组相比，IL-1β+sh-circFOXO3+TGXTC组中circFOXO3水平显著上调。Western blot结果表明，IL-1β组软骨细胞中升高的GLUT1、HK2、PKM2、LDHA、MMP13蛋白被透骨消痛胶囊干预后显著抑制，但在circFOXO3沉默后，透骨消痛胶囊对这些蛋白的调控作用减弱。综上，透骨消痛胶囊通过调控circFOXO3缓解OA软骨细胞糖酵解代谢紊乱，延缓OA退变。
文章目录
1 材料
1.1 动物
1.2 药物与试剂
1.3 仪器
2 方法
2.1 动物分组、造模及干预
2.2 组织取材及含药血清的制备
2.3 软骨组织形态学观察
2.4 小鼠关节软骨组织中circFOXO3 mRNA表达水平变化情况
2.5 小鼠关节软骨组织中GLUT1、HK2、PKM2、LDHA、MMP13蛋白表达含量变化情况
2.6 构建体外软骨细胞OA模型
2.7 荧光原位杂交（FISH）检测软骨细胞中circFOXO3的表达
2.8 RT-qPCR检测circFOXO3沉默条件下透骨消痛胶囊对IL-1β诱导的小鼠软骨细胞中circFOXO3表达变化
2.9 Western blot检测circFOXO3沉默条件下透骨消痛胶囊对IL-1β诱导的小鼠软骨细胞中GLUT1、HK2、PKM2、LDHA、MMP13的蛋白表达变化
2.10 统计学分析
3 结果
3.1 一般情况观察
3.2 小鼠关节软骨组织病理改变情况
3.3 各组小鼠关节软骨组织中circFOXO3的mRNA水平
3.4 各组小鼠关节软骨组织中GLUT1、HK2、PKM2、LDHA、MMP13蛋白含量表达
3.5 FISH检测
3.6 RT-qPCR检测circFOXO3沉默
