摘要：目的 探究氧戊二酸脱氢酶L（oxoglutarate dehydrogenase-L，OGDHL）在肾纤维化中的作用及其机制。方法 12只雄性野生型C57小鼠(8周龄，体质量约25 g)分为对照组与UUO组(n=6)，通过单侧输尿管结扎术（unilateral ureteral obstruction，UUO）建立小鼠肾纤维化模型，术后14 d取材肾脏。采用苏木精-伊红（hematoxylin and eosin，HE）染色、免疫荧光、免疫组织化学染色、Masson染色检测模型的纤维化程度；培养人近端小管上皮细胞（human proximal tubular epithelial cells，HK-2），分为对照质粒空载体组（Vector组）、过表达OGDHL 组（OGDHL OE组）、TGF-β1+对照质粒空载体组（TGF-β1+ Vector组）、TGF-β1 +过表达OGDHL 组（TGF-β1+OGDHL OE组）4组，通过透射电镜观察线粒体形态；通过qPCR、Western blot、免疫荧光检测OGDHL及线粒体代谢相关基因的表达水平；并通过试剂盒检测三磷酸腺苷（adenosine triphosphate，ATP）水平，通过Agilent Seahorse仪器检测氧耗率（oxygen consumption rate，OCR）、细胞外酸化率（extracellular acidification rate，ECAR）等线粒体代谢相关指标。结果 UUO术后肾脏HE染色显示肾皮质明显变薄、肾积水显著、小管萎缩、管腔扩大，免疫荧光、免疫组织化学染色、Masson染色显示纤维化明显。肾纤维化时，肾脏OGDHL的表达在mRNA水平下降82.9%（P<0.001），在蛋白水平下降81.9%（P<0.001）。线粒体ATP生成减少0.9702±0.1506 μmol/L（P<0.01），线粒体结构损伤，OCR降低25.26±1.921 pmol/min（P<0.001），脂肪酸氧化相关基因下降50.2%（P<0.05），糖酵解增强，糖酵解相关基因上升为对照组的2.5倍（P<0.05）。OGDHL过表达后线粒体形态学损伤显著改善，ATP生成增加0.98±0.0866 μmol/L（P<0.001），能量代谢障碍显著缓解，肾纤维化明显减轻（P<0.05）。结论 OGDHL调控线粒体代谢重编程从而缓解肾小管上皮细胞的纤维化，提示OGDHL可能成为肾纤维化治疗的新靶点。
文章目录
1 材料与方法
1.1 材料与实验试剂
1.2 HK-2细胞的培养与分组
1.3 小鼠UUO模型的建立
1.4 ATP的检测
1.5 Western blot检测
1.6 qPCR检测
1.7 免疫组织化学染色
1.8 免疫荧光染色
1.9 透射电镜观察
1.10. Agilent Seahorse检测氧耗率OCR、细胞外酸化率ECAR
1.11.Masson染色
1.12.统计学分析
2 结果
2.1 肾纤维化的建立与验证
2.2 肾纤维化中OGDHL的表达显著下降
2.3 肾纤维化中线粒体代谢障碍
2.4 过表达OGDHL缓解肾纤维化中线粒体代谢障碍
3 讨论
