摘要：为了建立一种快速检测牛冠状病毒（Bovine coronavirus，BCoV）的方法，本研究以BCoV相对保守的N基因为模板，设计特异性探针和引物，通过筛选最优引物对、摸索最适反应温度，建立BCoV荧光RT-RAA检测方法，并对其敏感性、特异性和重复性进行研究。该方法能够在41 ℃恒温条件下，在20 min内完成检测，最低检测限为24 copies/μL，多次重复试验中扩增曲线重合率高，且与牛轮状病毒、牛传染性鼻气管炎病毒、牛病毒性腹泻病毒、牛呼吸道合胞体病毒均无交叉反应。使用该方法与实时荧光RT-PCR检测方法同时对89份临床样品核酸进行检测，两种方法符合率达100.00%。结果表明，建立的BCoV荧光RT-RAA检测方法简便、快速，敏感性、特异性和重复性良好，适用于BCoV的早期诊断和快速筛查。
文章目录
1 材料和方法
1.1 临床样本与阳性核酸
1.2 主要试剂与仪器
1.3 引物、探针的设计与合成
1.4 质粒标准品的制备
1.5 荧光RT-RAA反应体系构建
1.6 引物筛选与反应温度优化
1.7 敏感性试验
1.8 特异性试验
1.9 重复性试验
1.10 临床样本检测
2 结果
2.1 重组质粒的鉴定结果
2.2 最佳引物筛选及最适反应温度的确定
2.3 敏感性试验结果
2.4 特异性试验结果
2.5 重复性试验结果
2.6 临床样品检测结果
3 讨论
