摘要：为建立能同时检测鸭甲肝病毒3型（DHAV-3）、鸭星状病毒3型（DAstV-3）和鸭腺病毒3型（DAdV-3）的多重PCR方法，根据DHAV-3、DAstV-3、DAdV-3基因组保守区域设计3对特异性引物，预期扩增片段大小分别为298 bp、505 bp、668 bp。通过对反应体系、反应条件进行优化，建立了DHAV-3、DAstV-3和DAdV-3的多重PCR检测方法，对其特异性、敏感性和重复性进行验证，并在临床上进行初步应用。结果显示，建立的多重PCR方法可同时扩增DHAV-3、DAstV-3、DAdV-3的目的片段，对其它鸭常见病原的检测均无扩增条带，三种病毒的最低检测限分别是1.0×103copies/μL，1.0×104copies/μL和1.0×104copies/μL，同一模板的3次重复性试验结果一致。应用多重PCR方法对临床样品进行检测，检测结果与常规单一（RT-）PCR符合率为100%。总之，建立的多重PCR方法特异性强、敏感性高、重复性好，可用于DHAV-3、DAstV-3、DAdV-3的临床检测和流行病学调查。
文章目录
1 材料与方法
1.1 试验毒株、临床样品及主要试剂、仪器
1.2 引物设计与合成
1.3 病毒核酸的提取
1.4 单一（RT-）PCR扩增及重组质粒标准品的制备
1.4.1 单一（RT-）PCR扩增
1.4.2 重组质粒标准品的制备
1.5 多重PCR方法的建立及条件优化
1.6 特异性检测
1.7 灵敏度检测
1.8 重复性检测
1.9 临床样品的检测
2 结果
2.1 单一（RT-）PCR扩增及重组质粒标准品的制备
2.2 多重PCR方法的建立及条件优化
2.3 多重PCR的特异性检测
2.4 多重PCR的灵敏度检测
2.5 多重PCR的重复性检测
2.6 临床样品的检测
3 讨论
