摘要：为了探究sox9基因在中华鳖胚胎性腺性别分化中的功能，实验通过将构建的慢病毒sox9-shRNA干扰和过表达载体系统引入性别分化启动前的胚胎，从组织学和分子研究水平分析了sox9基因异常表达后性腺的性逆转情况。功能缺失实验结果显示，敲低sox9后的ZZ胚胎性腺外形和内部结构明显雌性化，生殖细胞呈现雌性分布模式，雄性特异性基因dmrt1和amh的mRNA表达显著降低，雌性特异性基因foxl2的mRNA表达则明显升高，DMRT1蛋白的表达信号几乎消失，FOXL2蛋白被激活大量表达，性腺发生了雄性向雌性完全性逆转（逆转率：87.9%）；功能获得实验结果显示，42.5%过表达sox9的ZW胚胎转向雄性分化方向，dmrt1和amh表达上升，foxl2表达下降，在性腺中同时检测到DMRT1和FOXL2蛋白的荧光信号，性逆转不彻底。上述研究表明，sox9是中华鳖早期睾丸形成的必需关键基因，参与调控雄性分化过程。
文章目录
1 材料与方法
1.1 鳖卵孵化和样品采集
1.2 sox9慢病毒干扰和过表达载体的构建及鳖胚感染
1.3 RNA提取和实时荧光定量PCR
1.4 石蜡切片和苏木素-伊红染色
1.5 免疫荧光染色
2 结果
2.1 sox9基因的功能缺失研究
2.2 sox9基因的功能获得研究
3 讨论
