摘要：目的：本研究旨在探究健肝乐颗粒对非酒精性脂肪性肝炎（non-alcoholic steatohepatitis，NASH）的保护作用及机制。方法：以60只雄性C57BL/6小鼠为研究对象，采用高脂和高胆固醇饲料喂养11周诱导NASH模型，健肝乐清膏灌胃6周后。测量小鼠肝质量和血糖，血清中肝功能，血脂以及肝组织中甘油三酯（TG）和总胆固醇（TC）的含量，HE和油红O染色观察肝组织形态学变化和脂质沉积情况；采用16SrDNA技术和非靶向代谢组学技术检测小鼠肠道菌群和粪便代谢物的变化情况；采用网络药理学预测健肝乐颗粒治疗NASH的核心基因，以DAVID数据平台对交集基因进行GO和KEGG富集分析，预测潜在信号通路。结果：与正常对照组比较，模型对照组小鼠的肝质量，血糖，肝组织中TC，TG含量，肝脏脂肪变性，炎性浸润，脂质沉积，血清中低密度脂蛋白胆固醇（LDL-c），丙氨酸氨基转移酶（ALT）、天门冬氨酸氨基转移酶（AST）显著升高（P<0.01）。与模型对照组比较，健肝乐清膏0.5、1.0g/kg组能显著降低上述生理指标（P<0.05或 P<0.01），同时健肝乐清膏1.0g/kg组显著降低小鼠脂肪变性和肝脏脂质堆积（P<0.01）。16SrDNA测序显示，健肝乐清膏1.0g/kg组能显著升高NASH模型小鼠Akkermansia、Phascolarctobacterium和 Allobaculum等有益菌属的相对丰度(P<0.05或P<0.01)。非靶向代谢组学显示，正常对照组，模型对照组和健肝乐清膏1.0g/kg组筛出的共有差异代谢物有18个，主要涉及胆汁酸代谢、初级胆汁酸生物合成、ABC转运蛋白、氨基酸生物合成、氨基糖和核苷酸糖代谢等通路。网络药理学预测表明，健肝乐治疗NASH的潜在靶点主要包括ALB、INS、TNF、IL-6、PPARG、AKT1、PPARA及IL-1β等以及PPAR和MAPK信号通路。结论：该研究发现健肝乐颗粒有效缓解NASH，其机制可能是影响了肠道菌群，显著增加了Akkermansia、Phascolarctobacterium和 Allobaculum等有益菌属的相对丰度和调节内源性代谢物的变化，显著下调胞内MAPKs和PPARγ等关键信号通路而发挥作用。
文章目录
1. 材料与方法
1.1 试验药物
1.2 动物
1.3 试剂
1.4仪器
1.5方法
1.5.1 NASH模型的建立及分组
1.5.2 样本收集
1.5.3 血糖、血脂、肝功能以及肝组织中TC，TG的测定
1.5.4 组织病理学检测
1.5.5 16S rDNA测序
1.5.6 非靶向代谢组学分析
1.5.7 健肝乐-NASH靶点的预测和分析
1.5.8 Western blot 检测肝组织 p-P38、p-ERK1/2和PPARγ 蛋白的表达
1.5.9 统计学方法
2结果
2.1 健肝乐清膏对NASH模型小鼠肝质量、血糖、肝组织TC、TG含量的影响
2.2 健肝乐清膏对NASH模型小鼠肝功能和血脂的影响
2.3 健肝乐清膏对NASH模型小鼠肝组织病理形态的影响
2.4健肝乐清膏对NASH模型小鼠肠道菌群的影响
2.5 健肝乐清膏对NASH模型小鼠粪便代谢组学的影响
2.6健肝乐成分与NASH靶点通路网络分析图
2.7健肝乐清膏对NASH模型小鼠肝组织MAPKs和PPARγ通路的影响
3 讨论
4 结论
