摘要：目的 通过观察丹参多酚酸盐对核苷酸结合寡聚结构域样受体蛋白3（NOD-likereceptorthermalproteindomainassociatedprotein3，NLRP3）/天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶1（cysteinylaspartatespecificproteinase-1，Caspase-1）/焦亡效应蛋白消皮素Ｄ（gasdermin-D，GSDMD）细胞焦亡通路的影响，探讨其改善膜性肾病（membranousnephropathy，MN）大鼠肾损伤可能的作用机制。方法SD大鼠通过尾静脉注射阳离子牛血清白蛋白（cationicbovineserumAlbumin，C-BSA）建立MN大鼠模型，造模成功后随机分为模型组、盐酸贝那普利组（10mg/kg）、丹参多酚酸盐低、中、高剂量组（16.7、33.3、66.7mg/kg），另设有正常组，每组均为10只。各给药组连续给药4周后，检测24小时尿蛋白定量（24-hoururinaryproteinquantity，24hUTP）和血肌酐（serumcreatinine，SCr）、血尿素氮（bloodureanitrogen，BUN）、血清总蛋白（totalprotein，TP）、血清白蛋白（serumalbumin，ALB）、甘油三酯（triglyceride，TG）、总胆固醇（Ttotalcholesterol，TC）的含量；酶联免疫吸附法（ELISA）检测大鼠血清白细胞介素-1β（interleukin-1β，IL-1β）、白细胞介素-18（interleukin-18，IL-18）；采用光镜、电镜、荧光显微镜观察肾脏病理学变化；蛋白免疫印迹法（Westernblot）、实时荧光定量PCR法检测NLRP3、Caspase-1、GSDMD蛋白及mRNA表达。结果 与模型组比较，各给药组24hUTP水平明显降低（P<0.05，P<0.01），丹参多酚酸盐中、高剂量组和盐酸贝那普利组大鼠血清TP和ALB水平显著升高（P<0.01），TC和TG水平明显降低（P<0.05、P<0.01）；普通光镜、荧光显微镜及电镜下观察可见模型组大鼠肾组织病理损伤明显，经各组药物治疗后病理损伤逐渐改善。与模型组比较，各给药组大鼠血清IL-1β、IL-18水平明显降低（P<0.05，P<0.01）；与正常组比较，模型组大鼠肾脏NLRP3、Caspase-1、GSDMD蛋白及其mRNA表达显著升高（P<0.01）；与模型组比较，各给药组大鼠肾组织NLRP3、Caspase-1、GSDMD蛋白及其mRNA表达水平明显降低（P<0.05，P<0.01），以丹参多酚酸盐高剂量组效果最佳。结论 丹参多酚酸盐对膜性肾病大鼠肾保护作用与调控NLRP3/Caspase-1/GSDMD细胞焦亡通路、改善炎症状态、减轻肾损伤有关。
文章目录
1 材料与方法
1.1 实验动物
1.2 实验药品与试剂
1.3 实验主要仪器
1.4 造模方法
1.5 分组及给药
1.6 标本采集
1.7 指标检测
1.7.1 血清生化指标检测
1.7.2 大鼠24小时 尿蛋白定量（24-hour urinary protein quantity，24 h UTP）检测
1.7.3 光镜、电镜下大鼠肾组织病理学观察
1.7.4 荧光显微镜下观察大鼠肾组织中IgG、C3沉积情况
1.7.5 酶联免疫吸附法检测血清IL-1β、IL-18含量
1.7.6 蛋白免疫印迹法检测大鼠肾组织中NLRP3、Caspase-1、GSDMD蛋白表达
1.7.7 实时荧光定量PCR检测大鼠肾组织中NLRP3、Caspase-1、GSDMD的mRNA表达
1.8 统计学分析
2 结果
2.1 生化指标及24 h UTP水平比较
2.2 各组大鼠肾脏病理组织形态比较
2.2.1 PASM染色
2.2.2 免疫荧光染色
2.2.3 电镜
2.3 各组大鼠血清IL-1β、IL-18水平比较
2.4 各组大鼠肾组织中NLRP3/Caspase-1/GSDMD信号通路蛋白表达比较
2.5 各组大鼠肾组织中NLRP3、Caspase-1及GSDMD的 mRNA表达情况比较
3 讨论
