摘要：目的 建立树鼩永生化角膜基质细胞(cornealstromalcells，CSCs)系，并探讨其在病毒感染中的应用。方法 利用组织块贴壁培养法分离培养树鼩原代CSCs，将携带SV40T基因的慢病毒转染细胞后，再挑取单克隆进行传代培养，传至50代以上进行形态学观察并与40代细胞形态进行比较，波形蛋白(vimentin)和SV40T基因免疫荧光鉴定、核型鉴定、细胞增殖曲线测定。用单纯疱疹病毒1型(herpessimplexvirus-1，HSV-1)(McKrae株)、寨卡病毒(Zikavirus，ZIKV)(GZ01株)、登革病毒Ⅱ型以及甲型流感病毒A/PR/8(H1N1)以下简称为H1N1(PR8株)在该细胞上进行病毒感染实验。结果 传至50代以上的树鼩永生化CSCs呈梭形，细胞形态结构与40代相比仍较好。vimentin和SV40T基因免疫荧光表达阳性。增殖曲线结果显示：细胞生长旺盛，第4～5天时处于对数生长期。原代细胞核型的染色体数稳定为62条，而永生化细胞第21、56代突变为64条且保持稳定。病毒感染实验显示：树鼩永生化CSCs对HSV-1(McKrae株)、ZIKV(GZ01株)、登革病毒Ⅱ型以及H1N1(PR8株)病毒敏感，产生较高感染滴度，分别为1.32×105CCID50/mL、5.62×106CCID50/mL、2.69×107CCID50/mL、7.76×104CCID50/mL。结论 成功建立了树鼩永生化CSCs细胞系，提示该细胞系可用于单纯疱疹病毒、寨卡病毒、登革病毒和甲型流感病毒感染眼角膜疾病的作用机制及抗病毒药物的研究。
文章目录
1 材料与方法
1.1材料
1.1.1实验动物
1.1.2病毒株
1.1.3细胞
1.1.4主要试剂与仪器
1.2方法
1.2.1细胞分离培养与纯化
1.2.2 细胞永生化及挑取单克隆
1.2.3免疫荧光鉴定
1.2.4 细胞增殖曲线测定
1.2.5细胞核型分析
1.2.6 病毒感染及滴度测定
2结果
2.1 形态学观察
2.2免疫荧光鉴定
2.3生长曲线测定
2.4核型分析
2.5 病毒滴度结果（CCID50）及细胞病变观察
3 讨论
