摘要：目的：探究野生型水疱性口炎病毒(VSV-IN株)对小鼠三阴性乳腺癌4T1细胞移植模型小鼠的免疫调节及肿瘤转移的影响。方法：VSV以MOI=1、MOI=10、MOI=100感染4T1细胞12、24、48 h后，CCK-8法检测4T1细胞死亡率，划痕愈合实验检测细胞迁移能力，qPCR检测细胞中E-cadherin、MMP-2、MMP-9 mRNA的表达。于雌性BALB/c小鼠脂肪垫接种细胞密度为1×106个/mL的4T1细胞0.1mL，构建4T1细胞荷瘤小鼠模型，待小鼠肿瘤体积达200 mm3，分别向移植瘤内注射PBS、TAX(15 mg/kg)、VSV(1×106 pfu/只)，每周一次。给药4次后，处死小鼠、剥离完整移植瘤组织，测量肿瘤体积及质量；肺组织病理切片经H-E染色后观察肿瘤肺部转移结节；流式细胞术检测脾组织中T细胞亚群比例；ELISA法检测小鼠血清IL-6及TNF-α水平；利用GEPIA在线分析乳腺肿中迁移相关蛋白mRNA的表达；免疫组化法检测肿瘤中MMP-2、MMP-9与E-cadherin的表达，利用蛋白-蛋白对接技术预测VSV的G蛋白、M蛋白与ERK2、E-cadherin的亲和力。结果：在MOI=100的VSV处理48 h后，4T1细胞死亡率显著高于对照组(P＜0.01)；与对照组相比，VSV组细胞迁移率明显降低(P＜0.01)，MMP-9 mRNA的相对表达量明显降低(P＜0.05)；与对照组小鼠相比，VSV组移植瘤生长较对照组减缓且终点体积显著减小(P＜0.05)，VSV组小鼠肺转移结节数量显著减少[(12.86±1.86)vs(24±3.67)个，P＜0.01]，脾内CD4+ T 、CD8+ T细胞比例显著升高(均P＜0.05)，血清TNF-α、IL-6含量显著升高(均P＜0.01)；GEPIA分析发现在乳腺癌中E-cadherin、MMP-9表达水平均高于癌旁组织(P＜0.05)；VSV组小鼠肿瘤细胞内MMP-9表达明显低于对照组(P＜0.05)；VSV的G、M蛋白与ERK2的结合自由能分别为–11.7 kcal/mol、–6.4 kcal/mol。结论：野生型VSV可抑制4T1细胞荷瘤小鼠的移植瘤生长及转移，这可能与其促进抗肿瘤免疫及调控迁移相关蛋白表达有关。
文章目录
1 材料与方法
1.1 主要材料与试剂
1.2 细胞及病毒的体外培养
1.3 CCK-8法检测VSV-IN对4T1细胞的抑制活性
1.4 划痕愈合实验检测VSV-IN对4T1细胞迁移能力的影响
1.5 qPCR法检测VSV-IN对4T1细胞迁移相关基因mRNA表达的影响
1.6 小鼠肿瘤模型的建立
1.7 小鼠肺表面转移结节及组织病理结构观察
1.8 流式细胞术检测4T1细胞荷瘤小鼠脾组织中T细胞亚群比例
1.9 ELISA法检测4T1细胞荷瘤小鼠血清中IL-6及TNF-α的含量
1.10利用GEPIA2.0分析乳腺癌中迁移相关蛋白的表达水平
1.11 IHC法检测移植瘤瘤组织中MMP-2、MMP-9、及E-Cadhein的表达
1.12 蛋白-蛋白对接预测
1.13 统计学处理
2 结 果
2.1 VSV-IN处理抑制4T1细胞增殖
2.2 VSV-IN处理抑制4T1细胞的迁移能力
2.3 VSV-IN处理抑制移植瘤生长并提高荷瘤小鼠生存率
2.4 VSV-IN处理降低荷瘤小鼠的肺、脾指数
2.5 VSV-IN处理影响4T1细胞荷瘤小鼠肺转移结节数量及组织结构
2.6 VSV-IN处理影响荷瘤小鼠脾中T细胞亚群比例
2.7 VSV-IN处理提高荷瘤小鼠血清中IL-6与TNF-α的水平
2.8 迁移相关蛋白在乳腺癌中的表达
2.9 VSV-IN处理对移植瘤组织中MMP-2、MMP-9、E-cadherin表达影响
2.10 利用蛋白-蛋白对接技术预测VSV G蛋白、M蛋白与ERK2、E-cadherin的亲和力
3 讨 论
