目的 探讨敦煌芮草膏对大鼠膝骨关节炎（KOA）的治疗作用及其机制。方法 将72只SPF级SD大鼠，按随机数字表法分为6组，每组12只。除空白组外，剩余60只大鼠采用关节腔注射木瓜蛋白酶制造KOA模型，并且分为5组，即模型组、双氯芬酸乳膏组（DDE）、按摩组（MGC）、敷药组（DRO）、膏摩组（DRO-M）。除空白组外，各组给予相应药物干预3周。通过CT影像学测定膝关节CT值，测量膝关节肿胀度并进行Lequesne评分，肉眼观察膝关节软骨并进行Pelletier评分，番红固绿、甲苯胺蓝、HE染色观察软骨组织形态结构并进行Mankin评分，ELISA法检测血清中白细胞介素（IL）-1β、转化生长因子-β1(TGF-β1)水平，Western Blot法检测软骨组织中IL-6、p38丝裂原活化蛋白激酶（p38 MAPK）、磷酸化（p）-p38 MAPK、基质金属蛋白酶13(MMP13)、血小板反应蛋白解整合素金属肽酶5(ADAMTS5)蛋白表达。免疫荧光法检测软骨组织MMP13平均荧光强度。结果 与空白组比较，模型组大鼠膝关节肿胀度显著增加（P<0.01）;Lequesne评分、膝关节CT值及软骨Pelletier评分均明显升高（P<0.01）；膝关节面完整性遭到破坏，在胫骨和股骨内侧形成了骨赘，导致关节腔间隙变窄，软骨微结构出现恶化，骨小梁网结构混乱，软骨厚度减少。HE染色病理结果显示，软骨结构破坏，表面裂隙达辐射层，细胞数量明显减少，形态异常；番红固绿染色中，软骨厚度变薄，基质着色浅；甲苯胺蓝染色中，软骨厚度变薄，基质着色浅，潮线紊乱；大鼠软骨组织甲苯胺蓝、番红固绿染色区域IOD值均降低（P<0.01）；血清中IL-1β表达水平升高，TGF-β1表达水平降低（P<0.01）；软骨组织中IL-6、p38MAPK、p-p38MAPK、MMP13、ADAMTS5蛋白表达水平均升高（P<0.01）;MMP13平均荧光强度增强（P<0.01）。与模型组比较，给药7天后，DRO-M组大鼠膝关节肿胀度及CT值均降低（P<0.05）;DRO组及DRO-M组大鼠Lequesne评分降低（P<0.05）。给药14天后，DRO组及DRO-M组大鼠膝关节肿胀度及CT值均降低（P<0.05,P<0.01）；各干预组大鼠Lequesne评分均降低（P<0.05,P<0.01），给药21天后，各干预组大鼠膝关节肿胀度、Lequesne评分及CT值均降低（P<0.01,P<0.05）。给药后各干预组关节骨赘生成物减少，关节间隙逐渐恢复正常，软骨结构趋于正常，骨小梁及软骨厚度亦逐渐恢复正常水平。其中DRO组及DRO-M组恢复水平最为显著，DDE组及MGC组恢复效果较差，软骨结构部分缺损，表面有裂纹，色泽较好；DRO组及DRO-M组软骨结构完整，表面较平滑、色泽好、基本无裂纹，接近正常水平。各干预组大鼠软骨Pelletier评分均降低（P<0.01,P<0.05）。HE染色病理结果显示，DDE组及MGC组软骨结构不规则，细胞数量弥漫性增多，形态改变，表现多重潮线；DRO组及DRO-M组软骨结构正常，表面光滑，软骨细胞数量丰富，形态正常，偶见小面积血管翳，结缔组织增生覆盖至软骨表面，潮线较完整。番红固绿染色中，DDE组及MGC组软骨厚度较厚，基质着色深；DRO组及DRO-M组软骨厚度接近空白组水平，基质着色深。甲苯胺蓝染色中，DRO组及DRO-M组表现良好，较模型组着色深，软骨厚度与空白组相似，潮线完整；DDE组及MGC组基质着色较模型组略深，软骨厚度轻微增厚，表现多重潮线。各干预组大鼠软骨组织甲苯胺蓝、番红固绿染色区IOD值均升高（P<0.01,P<0.05）。除MGC组外，各干预组大鼠血清中IL-1β水平均降低，TGF-β1表达水平均升高（P<0.01,P<0.05）。软骨组织中MMP13、p38MAPK、p-p38MAPK、IL-6、ADAMTS5蛋白表达水平均降低（P<0.01,P<0.05）;MMP13平均荧光强度均减弱（P<0.01,P<0.05）。结论 敦煌芮草膏具有改善大鼠KOA症状的作用。这种作用机制可能是通过抑制p38MAPK信号通路，进而下调p38MAPK、p-p38MAPK、MMP13、ADAMTS5蛋白表达来实现的。
