摘要：为预防狐、貉细菌性肺炎，本实验研制了针对狐、貉大肠杆菌、肺炎克雷伯氏菌和奇异变形杆菌的菌壳疫苗。实验采用NaOH稀释法测定这些细菌的最适抑菌浓度和时间，并通过最适抑菌浓度的NaOH处理细菌，评估其裂解率，制备菌壳。利用电镜观察处理后细菌表面结构，并以甲醛灭活疫苗为对照，评估三联菌壳疫苗的安全性、IgG抗体水平和免疫保护率。结果表明，NaOH 对大肠杆菌的最适抑菌浓度和时间为2.5 mg/mL、75 min，对肺炎克雷伯菌最适抑菌浓度和时间为2.5 mg/mL、120 min，对奇异变形杆菌最适抑菌浓度和时间为2.5 mg/mL、180 min，NaOH 处理后裂解率达到100%；电镜扫描显示细菌表面形成孔洞并排出内容物形成菌壳；免疫结果显示，三联菌壳疫苗IgG抗体水平高于甲醛灭活苗，且在免疫小鼠后可获得100%保护率。综上，利用NaOH处理可成功制备狐、貉大肠杆菌、肺炎克雷伯氏菌和奇异变形杆菌菌壳，免疫小鼠可获得高于甲醛疫苗的IgG抗体水平和保护率。
文章目录
1 材料与方法
1.1 菌种与主要试剂
1.2 主要仪器
1.3 实验动物
1.4 菌种的培养
1.5 NaOH 最适抑菌浓度及时间的测定
1.6 菌壳的制备与裂解率的计算
1.7 形态学观察
1.7.1 革兰氏染色
1.7.2 电镜观察
1.8 免疫学分析
1.8.1 菌株半数致死量(LD50)的测定
1.8.2 甲醛灭活疫苗的制备
1.8.3 免疫方案
1.8.4 疫苗的安全性评价
1.8.5 检测小鼠血清中IgG抗体水平变化
1.8.6 小鼠免疫保护率测定
2结果与分析
2.1 NaOH化学法制备条件优化
2.2 形态学观察
2.2.1 革兰氏染色
2.2.2 透射电镜观察
2.3 半数致死量(LD50)的测定
2.4 裂解率检测
2.5 安全性评价
2.6 小鼠血清中IgG抗体水平变化结果
2.7 免疫保护
3 讨论与结论
