摘要：为研究油料作物油莎豆(Cyperus esculentus L.)铜/锌超氧化物岐化酶基因CeCSD的结构特征及其在低温胁迫中的功能，本研究以低温胁迫下油莎豆的叶片转录组数据为基础，采用巢式PCR克隆技术获得CeCSD基因，并对其进行了生物信息学分析、原核表达及在低温胁迫下的表达模式研究。结果表明，CeCSD基因的序列长度为992 bp，其开放读码框(ORF)为603 bp。生物信息学分析结果表明CeCSD含有一个铜/锌超氧化物歧化酶保守结构域，多序列比对结果表明其具有高度保守性，蛋白二级结构主要由α-螺旋、延伸链和不规则卷曲构成，亚细胞定位预测在叶绿体上，进化树结果表明CeCSD与拟南芥中的AtCSD1、AtCSD2、AtCSD3是同一类。CeCSD融合蛋白可在大肠杆菌BL21 (DE3)表达宿主中成功表达，分子量约为35 kD。RT-qPCR分析发现CeCSD基因在4 ℃低温胁迫条件下，其相对表达量表现出先上升后下降的趋势，说明CeCSD基因能响应低温胁迫。
文章目录
1结果与分析
1.1油莎豆CeCSD基因的克隆
1.2 CeCSD基因的生物信息学分析
1.2.1 CeCSD编码蛋白理化性质、亚细胞定位和保守结构域分析
1.2.2多序列比对与进化分析
1.3基因的低温响应表达模式
1.4 CeCSD在原核细胞中的表达
2讨论
3材料与方法
3.1试验材料
3.2总RNA提取和cDNA合成
3.3油莎豆CeCSD基因的克隆
3.4 CeCSD的序列分析
3.5油莎豆CeCSD原核表达载体构建
3.6 CeCSD在低温胁迫下的表达模式
