摘要：旨在研究热应激（heat stress， HS）对从江香猪十二指肠黏膜屏障结构的影响，同时跟踪检测低氧诱导因子-1（hypoxia inducible factor-1， HIF-1）的表达特征及调控机制。试验选取24头育肥期从江香猪，随机分为6组，除对照组（Con），其余5组进行不同时间热应激处理（6、12、24、48、72 h），试验过程中检测香猪直肠温度和呼吸频率，试验结束时采集各组香猪十二指肠。苏木精-伊红染色（HE）和阿利新蓝-过碘酸雪夫反应（AB-PAS）观察各组十二指肠组织结构和杯状细胞数量变化；TUNEL染色检测十二指肠细胞凋亡率；实时荧光定量（qRT-PCR）、蛋白免疫印迹（Western blot）和免疫组织化学分别检测紧密连接相关蛋白、HIF-1及其上游调控因子HSP90和PHD-2的表达变化。结果显示，与对照组相比，热应激可使从江香猪直肠温度和呼吸频率明显升高，肠绒毛高度下降，隐窝深度增加，绒腺比降低，闭合蛋白（Occludin）和紧密连接蛋白1（ZO-1）表达水平呈时间依赖性下降，杯状细胞数量增多。TUNEL检测结果显示，HS处理72 h后，十二指肠上皮细胞凋亡率显著上升（P<0.001）。免疫组织化学、qRT-PCR和Western blot对HIF-1α、HSP90和PHD-2的表达进行检测，结果显示，相较于对照组，HS处理72 h后十二指肠黏膜上皮HIF-1表达强度、HIF-1α mRNA和蛋白表达量随HS时间延长而增加；HSP90阳性细胞在对照组和热应激组中均集中于黏膜上皮，其表达趋势与HIF-1α一致；PHD-2表达特征与HSP90相反，其表达强度在HS组中明显减弱，且随HS时间增加，PHD-2 mRNA和蛋白水平均呈时间依赖性下降。以上结果说明，HS可引起十二指肠上皮细胞凋亡，损伤十二指肠黏膜屏障；HIF-1的表达升高与小肠细胞凋亡密切相关，且可能同时受HSP90和PHD-2调控。
文章目录
1 材料与方法
1.1 材料
1.1.1试验动物分组
1.1.2 样品采集
1.1.3主要试剂
1.2 方法
1.2.1肠绒毛高度及隐窝深度的测量
1.2.2 AB-PAS染色和杯状细胞计数
1.2.3 TUNEL染色
1.2.4免疫组织化学
1.2.5实时荧光定量PCR
1.2.6 Western blot
1.2.7统计分析
2 结 果
2.1 热应激对肠绒毛结构及细胞紧密连接蛋白表达的影响
2.2 热应激对十二指肠黏膜杯状细胞数量的影响
2.3 热应激对十二指肠细胞凋亡的影响
2.4 热应激下HIF-1α、HSP90和PHD-2的表达定位
2.5 热应激对HIF-1α、HSP90和PHD-2表达量的影响
3 讨 论
3.1热应激引起的病理变化
3.2 热应激对肠道黏膜屏障的影响
3.3 热应激对小肠上皮细胞凋亡的影响
3.4 HIF-1及其相关蛋白的表达调控
4 结 论
