为了验证先导编辑(prime editing,PE)在猪细胞HBB基因中的编辑效率,并比较其在人细胞与猪细胞中的编辑效率,试验通过生物信息学分析,选择β珠蛋白生成障碍性贫血致病位点-28(A>G)、CD17(A>T)、CD41/42(-TCTT)设计并合成基因编辑质粒,通过脂质体Lipofectamine 2000转染人肾上皮细胞系(HEK293T)和猪肾上皮细胞系(PK-13)并进行药物筛选,提取细胞基因组进行PCR扩增,对PCR扩增产物进行TA克隆后测序,统计各位点的编辑效率;然后通过改进向导RNA骨架序列、添加小分子药物等方法对PK-13中的先导编辑进行优化。结果表明:先导编辑系统PEmax在PK-13中具有编辑作用,猪HBB基因-28(A>G)、CD17(A>T)、CD41/42(-TCTT)位点先导编辑的正确编辑效率分别为9.44%、8.89%和4.76%,较人HBB基因相应位点的正确编辑效率低33.89%、42.22%和26.11%,差异显著(P<0.05)。而经过优化peg RNA序列后猪细胞中正确编辑效率达到了12.78%[CD17(A>T)]、11.67%[CD41/42(-TCTT)],均显著高于peg RNA骨架序列优化前的7.22%和5.33%,是未优化前的1.8～2.2倍,差异显著(P<0.05)。说明先导编辑在猪细胞中具有编辑效率,且可以通过改进peg RNA的策略进一步提高正确编辑效率。
