摘要：目的：探讨Res（resveratrol，Res）对甲状腺癌细胞的作用，分析靶基因及信号通路。方法：CCK-8法检测Res对甲状腺癌细胞TPC-1、FTC-133、BC-PAP存活率的影响，选择对Res耐受度最低的TPC-1细胞进行克隆实验、划痕试验、Transwell试验，检测Res对细胞增殖、迁移、侵袭能力的影响。mRNA-seq筛选Res调控的差异基因（DEGs），对DEGs进行GO&KEGG分析，qRT-PCR验证DEGs，Western blot检测p53信号通路相关蛋白变化。Kaplan-Meier plotter分析DEGs与甲状腺癌患者总生存期的关联，敲低基因FLG的表达并验证敲低效率，CCK-8法、克隆实验、划痕试验、Transwell试验检测FLG敲低后细胞增殖、侵袭、迁移能力变化。结果：Res显著抑制TPC-1、FTC-133、BC-PAP的细胞存活率，抑制TPC-1细胞增殖、侵袭、迁移能力。p53信号通路是Res作用的关键信号通路，Res上调p53蛋白表达，下调蛋白p21表达。FLG敲低后细胞增殖、侵袭及迁移能力下降。结论：FLG可能是甲状腺癌的促癌基因。Res显著抑制甲状腺癌细胞增殖、侵袭及迁移能力，其机制可能与抑制FLG和p53信号通路表达有关。
文章目录
1 材料
1.1 细胞株
1.2 试剂
2 方法
2.1 Res溶液的制备
2.2 细胞分组
2.3 CCK-8法检测细胞存活率
2.4 细胞划痕试验检测细胞迁移能力
2.5 细胞克隆实验检测细胞增殖能力
2.6 Transwell实验检测细胞侵袭、迁移能力
2.7 生物信息学分析
2.8 RT-PCR法检测FLG、INTS8、PTOV1、RTRAF mRNA表达水平
2.9 Western blot法检测相关蛋白表达水平
2.10 siRNA转染敲低FLG表达水平
2.11 统计学处理
3 结果
3.1 Res抑制甲状腺癌细胞存活率
3.2 Res抑制细胞增殖、侵袭及迁移能力
3.3 差异基因的识别
3.4 差异基因的功能富集分析
3.5 差异基因的验证及筛选
3.6 FLG敲低抑制甲状腺癌细胞增殖、侵袭及迁移
4 讨论
