金耳和毛韧革菌麦角硫因生物合成基因的克隆及生物信息学分析

2024-05-27 生物技术通报150 2.13M 0

  【目的】探讨金耳和毛韧革菌麦角硫因生物合成途径。【方法】利用PCR扩增技术分别克隆金耳和毛韧革菌的麦角硫因合成酶基因Egt1和Egt2并利用生物信息学软件分析其功能;高效液相色谱技术鉴定2个物种的组氨酸三甲基内盐中间产物、麦角硫因及其含量。【结果】成功克隆得到了2个物种Egt1和Egt2基因的完整DNA序列。生物信息学分析表明,2个物种的Egt1均含有EgtD和SAM依赖性甲基转移酶等功能结合域,Egt2均含有磷酸吡哆醛(LPL)和半胱氨酸脱硫酶的结合位点;Egt1和Egt2与裂殖酵母和粗糙脉孢菌等模型真菌具有相似的功能域和底物结合位点,表明Egt1和Egt2可能与这些模式真菌具有相似的基因功能。高效液相色谱法分析表明,金耳芽孢(JEYB)、毛韧革菌发酵液(ShFJY)、菌丝体(ShJST)及金耳子实体(JEZST)中均含有组氨酸三甲基内盐和麦角硫因,并且金耳子实体麦角硫因含量最高(113.19μg/g),分别是金耳芽孢、毛韧革菌发酵液和毛韧革菌菌丝体的7.45倍、26.14倍和27.74倍。【结论】首次鉴定了金耳和毛韧革菌的Egt1和Egt2基因。推测金耳和毛韧革菌的生物合成途径都是由组氨酸在Egt1酶催化形成组氨酸三甲基内盐,再由Egt1酶催化形成海西烯半胱氨酸亚砜,最后由Egt2酶催化最终形成麦角硫因。



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