摘要：目的：采用雷公藤多苷诱导卵泡发育不良大鼠模型，基于“以方测证”理论从腺苷酸活化蛋白激酶/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白/缺氧诱导因子-1/血管内皮生长因子(AMPK/mTOR/HIF-1/VEGF)通路探索该模型的证候属性。方法：将48只具有规律动情周期大鼠随机分为正常组(n=8)和造模组(n=40)，造模组大鼠连续灌胃雷公藤多苷混悬液(75 mL·kg-1)30 d，造模后将其分为模型组、四物汤组(3.69 g·kg-1)、右归饮组(3.11 g·kg-1)、左归饮组(7.29 g·kg-1)和归肾丸组(10.35 g·kg-1)，每组8只。相应药物干预14 d。巴氏染色检测各组大鼠动情周期变化；体视镜观察卵巢组织形态；苏木素-伊红(HE)染色观察卵巢组织病理学及卵泡计数；酶联免疫吸附测定法(ELISA)测定血清促卵泡激素(FSH)、黄体生成素(LH)及雌二醇(E2)含量；实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)和蛋白免疫印迹法(Western blot)检测卵巢组织AMPK、mTOR、HIF-1、VEGF mRNA及蛋白表达。结果：与正常组比较，模型组大鼠动情周期紊乱，次级、成熟卵泡减少，闭锁卵泡增多，FSH、LH、AMPK mRNA及蛋白表达显著升高(P<0.01)，E2含量，mTOR、HIF-1、VEGF mRNA及蛋白表达显著降低(P<0.01)；与模型组比较，归肾丸组次级、成熟卵泡增多，闭锁卵泡减少，FSH、LH含量、AMPK mRNA表达及蛋白表达显著降低(P<0.01)，E2含量、mTOR、HIF-1、VEGF mRNA表达及蛋白表达显著升高(P<0.01)。各治疗组之间比较：与归肾丸组比较，四物汤组、右归饮组、左归饮组成熟卵泡数量显著减少，闭锁卵泡数量显著增多(P<0.01)；四物汤组、右归饮组、左归饮组LH显著升高(P<0.01)，FSH升高(P<0.05)，E2降低(P<0.05)；右归饮组AMPK蛋白表达升高(P<0.05)，mTOR和HIF-1 mRNA表达显著降低(P<0.01)，VEGF蛋白及mRNA表达显著降低(P<0.01)；四物汤组mTOR和HIF-1 mRNA，VEGF蛋白及mRNA表达降低(P<0.05)；左归饮组mTOR mRNA和VEGF蛋白及mRNA表达降低(P<0.05)。结论：归肾丸可以抑制AMPK/mTOR/HIF-1/VEGF通路来改善卵泡发育不良大鼠模型的卵巢功能、促进卵泡成熟，且总体疗效优于左归饮、右归饮和四物汤，表明该模型的证候更符合肾精亏虚证。
文章目录
1 材料
1.1 动物
1.2 药物
1.3 试剂
1.4 仪器
2 方法
2.1 FM模型制备与分组给药方法
2.2 观察指标
2.2.1 体质量及动情周期变化
2.2.2 卵巢形态及卵巢系数
2.2.3 卵巢组织病理学及卵泡计数
2.2.4 ELISA检测大鼠血清中E2、FSH、LH含量
2.2.5 Real-time PCR检测AMPK、mTOR、HIF-1、VEGF mRNA表达
2.2.6 Western blot检测大鼠卵巢组织AMPK、mTOR、HIF-1、VEGF蛋白表达
2.3 统计学方法
3 结果
3.1 对FM大鼠一般情况及体质量比较
3.2 对FM大鼠动情周期的影响
3.3 对FM大鼠卵巢组织解剖学及卵巢指数的影响
3.4 对FM大鼠卵巢组织病理学及各级卵泡计数的影响
3.5 对FM大鼠血清FSH、LH、E2含量的影响
3.6 对FM大鼠卵巢组织AMPK、mTOR、HIF-1、VEGF的mRNA表达水平的影响
3.7 对FM大鼠卵巢组织AMPK、mTOR、HIF-1、VEGF的蛋白表达水平的影响
4 讨论
5 结论
