目的：探讨铁皮石斛多糖(DOP)对老年小鼠肠道黏膜屏障损伤的保护作用，并阐明其可能的作用机制。方法：选择10只雌性5月龄C57BL/6小鼠为年轻组，将20只C57BL/6小鼠(15月龄)随机分为老年组和老年鼠DOP (200 mg·kg-1·d-1)处理组(DOP组)，每组10只。DOP组小鼠采用DOP灌胃，检测各组小鼠体质量、摄食量和悬挂时间；苏木精-伊红(HE)染色观察各组小鼠肠道和脾脏组织病理形态表现；免疫组织化学染色检测各组小鼠肠道组织中闭锁小带蛋白-1 (ZO-1)和黏蛋白2 (MUC2)的表达情况。制备肠菌代谢物培养基(IBMM)干预秀丽线虫(C. elegans)，将C. elegans随机分为年轻IBMM组(Young-IBMM)、老年IBMM组(Aged-IBMM)和DOP-IBMM组，采用免疫荧光法分析各组C. elegans第1和12天的肠道脂褐素累积水平；亮蓝染色评估各组C. elegans第1和12天的肠道渗漏情况。制备IBMM干预Caco-2细胞，将Caco-2细胞分为Young-IBMM组、Aged-IBMM组和DOP-IBMM组，Westernblotting法检测各组Caco-2细胞中ZO-1、闭合蛋白(Occludin)、肿瘤坏死因子α (TNF-α)、白细胞介素6 (IL-6)、磷酸化肌球蛋白轻链(p-MLC)和肌球蛋白轻链激酶(MLCK)蛋白表达水平。结果：与年轻组比较，老年组小鼠体质量增加(P<0.05)，摄食量降低(P<0.05)，悬挂时间变短(P<0.05)；与老年组比较，DOP组小鼠体质量明显减轻(P<0.01)，摄食量增加(P<0.05)，悬挂时间明显延长(P<0.01)。HE染色，与年轻组比较，老年组小鼠肠黏膜厚度变薄，杯状细胞减少，肠绒毛长短不一且排列无序，脾脏表面可见大量铁血黄素存在，红髓内细胞成分减少，白髓内动脉周围淋巴鞘和淋巴小结残存或几乎消失；与老年组比较，DOP组小鼠肠黏膜厚度增加，杯状细胞增多，肠绒毛长度一致且排列整齐，脾脏红髓整体功能改善，白髓成分增加。免疫组织化学染色，与年轻组比较，老年组小鼠肠道组织中ZO-1和MUC2蛋白表达水平明显降低(P<0.05或P<0.001)；与老年组比较，DOP组小鼠肠道组织中ZO-1和MUC2蛋白表达水平明显升高(P<0.05或P<0.001)。免疫荧光法，与Young-IBMM组比较，Aged-IBMM组C. elegans肠道内脂褐素累积水平明显升高(P<0.001)；与Aged-IBMM组比较，DOP-IBMM组C. elegans肠道内脂褐素累积水平明显降低(P<0.001)。亮蓝染色法，与Young-IBMM组比较，Aged-IBMM组C. elegans亮蓝染料渗漏至线虫全身，肠道结构变得模糊不清，不易观察；与AgedIBMM组比较，DOP-IBMM组C. elegans亮蓝染料渗漏减少。Western blotting法，与Young-IBMM组比较，Aged-IBMM组Caco-2细胞中TNF-α、IL-6、p-MLC和MLCK蛋白表达水平明显升高(P<0.01或P<0.001),ZO-1和Occludin蛋白表达水平明显降低(P<0.05或P<0.01)；与Aged-IBMM组比较，DOP-IBMM组Caco-2细胞中TNF-α、IL-6、p-MLC和MLCK蛋白表达水平明显降低(P<0.01),ZO-1和Occludin蛋白表达水平明显升高(P<0.05或P<0.01)。结论：DOP对老年小鼠肠道黏膜屏障损伤有改善作用，其作用机制可能与通过调节肠菌代谢物、抑制p-MLC/MLCK通路、恢复紧密连接复合物表达、降低肠道炎症水平、进而改善肠道屏障损伤有关。
