摘要：目的：通过体外实验探讨加味芍药甘草汤对子宫腺肌病（Adenomyosis，AM）异位子宫内膜间质细胞（Endometrial stromal cells，EScs）的迁移、侵袭和血管生成过程的影响。方法：原代收集、培养并分离EScs，利用细胞免疫组化法进行细胞鉴定，通过Transwell迁移、侵袭实验检测加味芍药甘草汤对EScs迁移、侵袭能力的影响，通过实时荧光定量PCR（RT-qPCR）法检测EScs中血管生成相关因子mRNA的表达，通过免疫荧光标记细胞中微血管密度（Microvascular density，MVD）。结果：收集、培养并分离的6例人AM原代细胞均为EScs。与空白对照组相比，1.69 g/kg加味芍药甘草汤10%含药血清组和地诺孕素组的细胞迁移和侵袭能力均显著降低（P<0.01），加味芍药甘草汤10%含药血清组Vegf、Hif-1α、Pdgf、Ang、Fgf1和Fgf2的mRNA表达明显下调（P<0.05或P<0.01），MVD免疫荧光明显降低（P<0.05），地诺孕素组Vegf、Pdgf、Ang和Fgf1的mRNA表达明显下调（P<0.05或P<0.01）；与正常对照血清组相比，加味芍药甘草汤10%含药血清组和地诺孕素组的细胞迁移和侵袭能力明显降低（P<0.05或P<0.01），加味芍药甘草汤10%含药血清组Fgf1和Fgf2的mRNA表达明显下调（P<0.05），地诺孕素组Ang的mRNA表达明显下调（P<0.05）。结论：所获细胞为EScs，加味芍药甘草汤含药血清可以限制EScs的迁移、侵袭能力，抑制血管生成相关因子的表达。
文章目录
1 材料与方法
1.1 动物及细胞 SPF级雌性SD大鼠来源于广东省医学实验动物中心，动物生产合格证号：SCXK（粤）2018-0002。动物饲养于广州中医药大学动物实验中心，动物实验过程及操作经广州中医药大学实验动物伦理委员会审查并批准，伦理编号：20220519004。AM的异位内膜组织来源于2022年6月～2022年12月在广州中医药大学第三附属医院妇科要求手术的AM患者（共6例），患者符合年龄30～50岁，未绝经，术前3个月未使用过激素及类似药物治疗，术后病理结果提示AM。本研究已通过广州中医药大学第三附属医院伦理委员会审批（批件号：PJ-KY-20211207-003），所有患者均已知悉并同意将其组织样本应用于实验。
1.2 试剂 胎牛血清（FBS）（批号：10099141）、DMEM高糖培养基（批号：C11995500BT）、0.25% 胰酶（批号：25200072），Gibco公司；胶原酶I型（sigma公司，批号：C0130-100MG）；波形蛋白（批号：ZM-0260）、广谱细胞角蛋白（批号：ZM-0069），中杉金桥公司；SABC二抗试剂盒（博士德公司，批号：SA1020）；DAB显色试剂盒（Elabscience公司，批号：E-IR-R101）；二甲基亚砜（DMSO）（MP公司，批号：196055）；Matrigel基质胶（BD公司，批号：356234）；结晶紫染色液（碧云天公司，批号：C0121）；SteadyPure通用型RNA提取试剂盒II（艾科瑞生物公司，批号：AG21022）；HiScript III逆转录试剂盒（批号：R323-01）、ChamQ 通用型qPCR专用预混液（批号：Q711-02），诺唯赞公司；CD31兔抗 (批号：GB11063-2-100)、破膜液 (批号：G1204）、牛血清白蛋白 BSA (批号：GC305010）、DAPI染色试剂 (批号：G1012）、 抗荧光淬灭封片剂（批号：G1401），塞维尔。
1.3方法
1.3.1细胞培养及处理
1.3.2加味芍药甘草汤含药血清的制备
1.3.3细胞分组
1.3.4细胞免疫组化鉴定
1.3.5 Transwell迁移实验检测加味芍药甘草汤对细胞迁移能力的影响
1.3.6 Transwell侵袭实验检测加味芍药甘草汤对细胞侵袭能力的影响
1.3.7实时荧光定量PCR（real-time quantitative PCR，RT-qPCR）检测细胞中血管生成相关指标的表达
1.3.8免疫荧光标记细胞中MVD的表达
1.3.9统计学方法
2 结果
2.1 原代培养细胞鉴定
2.2 1.69 g/kg加味芍药甘草汤10%含药血清对EScs迁移能力的影响
2.3 1.69 g/kg加味芍药甘草汤10%含药血清对EScs侵袭能力的影响
2.4 1.69 g/kg加味芍药甘草汤10%含药血清对EScs血管生成相关指标的mRNA表达的影响
2.5 1.69 g/kg加味芍药甘草汤10%含药血清对EScs MVD的影响
3 讨论
4 结论
