摘要：由植原体侵染引起的槟榔黄化病(Areca palm yellow leaf disease， YLD)是槟榔生产上一种毁灭性病害。目前，在中国引起槟榔黄化病的植原体主要有16SrI组、16SrII组及16SrXXXII组3个种群。为了对槟榔黄化植原体16SrI组群体进行检测，本研究基于槟榔黄化病植原体16SrI组secY基因，设计实时荧光定量PCR特异性引物和探针，对该引物探针组合进行准确性、灵敏度、特异性及重复性测试，并对儋州的槟榔黄化样品进行检测应用。结果显示，在准确性方面，引物qSecY-F1/R1和探针qSecY-P1能够准确检测出槟榔黄化植原体16SrI组样品；在灵敏度方面，该引物探针组合能检测到4.81×101 copies/μL数量级，标准品的Ct值与质粒拷贝数的对数呈线性关系，标准曲线方程为y=-3.578 8x+43.342，相关系数R2=0.993，扩增效率为90.29%，说明该检测方法适用于低浓度植原体检测和定量分析，扩增效率符合检测技术要求；在特异性方面，该引物探针组合具有较好的特异性，16SrII组和16SrXXXII组的植原体、槟榔相关的病原及内生菌均对本引物探针无影响；在重复性方面，组内和组间重复的变异系数均低于1%，具有较好的重复性；利用该引物探针，儋州地区36份槟榔样品共22份检查为阳性，检出率为61.11%。综上，该实时荧光定量PCR检测方法能满足对槟榔黄化植原体16SrI组的检测需求，可为该群体的流行学研究提供技术参考。
文章目录
1结果与分析
1.1准确性验证
1.2灵敏度测试及标准曲线的构建
1.3特异性测试
1.4重复性测试
1.5槟榔黄化样品检测
2讨论
3材料与方法
3.1供试样品
3.2主要试剂与仪器
3.3引物探针设计与合成
3.4 DNA提取
3.5引物和探针的准确性验证
3.6重组质粒标准品的构建
3.7灵敏度测试及标准曲线的构建
3.8特异性测试
3.9重复性测试
3.10槟榔黄化样品检测
